急性髓系白血病（AML）作为恶性程度最高的血液肿瘤之一，其对传统化疗及免疫治疗的耐药性问题长期困扰临床。近年研究发现，肿瘤细胞通过劫持免疫检查点分子实现"免疫逃逸"，但针对AML的特异性免疫抑制机制仍存在巨大认知盲区。本研究首次揭示，LILRB4/APOE信号轴通过重构肿瘤微环境，形成"免疫沉默-代谢重编程"双重防御体系，为AML精准治疗开辟全新路径。
本研究首次揭示LILRB4通过"配体-受体-信号-效应"四层架构调控AML免疫逃逸与转移，提出"免疫抑制-代谢重编程"双轨机制假说。靶向LILRB4的抗体疗法在临床前模型中展现出高效低毒特性，为单核细胞AML精准治疗提供新策略。相关成果已申请国际专利（PCT/US2016/020838），并与Immune-Onc Therapeutics公司达成转化合作。
研究方法
1. 临床样本分析
-
利用TCGA数据库分析LILRB4 mRNA表达水平与AML患者预后的相关性，发现其高表达与生存期缩短显著相关。
-
流式细胞术验证LILRB4在单核细胞AML（FAB M4/M5亚型）中特异性高表达于肿瘤细胞表面，且高于正常单核细胞。
2. 功能验证
-
体外实验：通过CRISPR/Cas9构建LILRB4敲除细胞系（lilrb4-KO），结合野生型（WT）及回补细胞（lilrb4-KO-wt），利用Transwell共培养体系评估T细胞增殖抑制能力。
-
体内模型：建立人源化免疫缺陷小鼠（NSG）及同源小鼠（C57BL/6）异种移植模型，通过皮下注射或静脉移植LILRB4敲除/过表达的AML细胞，监测肿瘤生长及T细胞浸润情况。
3. 机制解析
-
配体鉴定：通过蛋白液相色谱（FPLC）、质谱（MS）及表面等离子共振（SPR）技术筛选并验证APOE为LILRB4特异性配体，结合常数（KD）为210 nM。
-
信号通路分析：采用Western blot、免疫沉淀（Co-IP）及RNA测序（RNA-seq）探究下游信号通路，发现LILRB4通过SHP-2磷酸化激活NF-κB通路，诱导uPAR及ARG1表达。
-
功能挽救实验：通过外源性补充APOE、uPAR或ARG1，验证其对T细胞抑制及肿瘤浸润的调控作用。
研究结果
1. LILRB4表达与AML预后及免疫抑制密切相关
-
TCGA数据显示，LILRB4高表达组患者总生存期显著缩短（HR=2.34, p=0.0003），且其表达水平与T细胞耗竭标志物（PD-1、TIM-3）呈正相关。
-
体外共培养证实，LILRB4+ AML细胞通过胞内段传递抑制信号，显著降低CD8+ T细胞增殖及IFN-γ分泌能力。
2. LILRB4通过APOE介导的信号轴调控T细胞抑制与肿瘤浸润
-
配体结合：APOE通过其N端结构域与LILRB4的Ig样结构域结合，激活下游SHP-2磷酸化（p-Y580），进而促进NF-κB入核，上调uPAR及ARG1表达。
-
功能依赖性：LILRB4敲除显著抑制THP-1细胞的跨内皮迁移能力（p<0.01），而APOE或uPAR回补可部分恢复其侵袭表型。
3. 靶向LILRB4的治疗潜力
-
体内验证：抗LILRB4抗体（Fc工程化改造以降低ADCC效应）显著抑制AML异种移植瘤生长（肿瘤体积减少67%，p<0.001），并延长荷瘤小鼠生存期（中位生存期从28天延长至45天）。
-
免疫重塑：抗体治疗促进肿瘤微环境中CD8+ T细胞浸润（浸润指数↑3.2倍），并增强其杀伤活性（颗粒酶B+ T细胞比例↑40%）。
-
安全性评估：正常造血干细胞（CD34+）表面LILRB4表达极低（MFI=12±3 vs. AML细胞MFI=120±15），抗体处理未影响人源化小鼠骨髓重建效率。
ATHENS为本研究所提供的产品
Athens Research & Biotechnology为本研究提供了多种APO家族蛋白（尤其是重组人APOE），直接支持了LILRB4配体筛选、信号通路解析及功能验证，是揭示“APOE/LILRB4轴”在白血病免疫逃逸中作用的关键合作伙伴。
具体产品：
APOA1
APOA2
APOA4
APOB
APOC1
APOC2
APOC3
hAPOE
功能用途：
-
作为候选配体，通过 蛋白液相色谱（FPLC） 和 表面等离子共振（SPR） 筛选，验证其与 LILRB4 的结合能力。
-
用于 体外实验 中模拟生理条件下APOE对LILRB4的激活作用，证明其通过特定结构域（如Ig样结构域）与LILRB4相互作用。
文献链接见原文：http://www.nbs-bio.com/article/2691.html
关于ATHENS
Athens Research & Technology公司（ART），自1986年成立以来，已近40年专注于生产优质天然蛋白质，致力于为体外诊断（IVD）行业及研究人员提供高纯度、高活性的产品。我们的制造流程严格，质量承诺值得信赖，确保客户能够依赖我们的蛋白质开发可靠、准确的诊断试剂，满足当今医疗保健的迫切需求。
详情请咨询 Athens 中国授权代理商——欣博盛生物
全国服务热线: 4006-800-892
邮箱: market@neobioscience.com
深圳: 0755-26755892 QQ:1030564316
北京: 010-88594029 QQ: 1627343418
上海: 021-34613729 QQ: 3196652930
广州: 020-87615159 香港: 852-69410778
代理品牌网站: www.nbs-bio.com
欣博盛品牌网站: www.neobioscience.net