大小鼠DRG原位注射与神经节取材全流程-技术前沿-资讯-生物在线

大小鼠DRG原位注射与神经节取材全流程

作者:深圳灵赋拓普生物科技有限公司 2025-06-20T00:00 (访问量:182)

在慢性疼痛机制研究与神经药物测试中,背根神经节(DRG)如同揭开神经奥秘的 “钥匙”。精准的 DRG 原位注射和神经节取材技术,是科研人员探索神经信号传导的核心技能。今天为大家拆解这套高难度实验操作,附详细步骤与避坑指南,建议收藏!

一、DRG 原位注射(以腰椎 DRG 为例)
🌟 操作核心四步曲

1. 麻醉与固定

动物进入深度麻醉状态后,以俯卧位将其牢固固定在手术台上。

2. 定位与暴露

  • 沿着背部正中线切开皮肤,接着分离肌肉。

  • 仔细咬除目标节段(像 L4、L5)的椎板,使硬脊膜以及下方呈晶莹珠状的 DRG 暴露出来。

3. 镜下精准注射

  • 在体视显微镜下开展操作,用精细镊子轻轻提起或者稳定 DRG 周围的组织。

  • 选用微量注射器或者胰岛素针。

  • 让针尖小心刺入 DRG 包膜,缓慢且稳定地注入预定体积的溶液(一般为 nL-μL 级)。

  • 要避免过度牵拉、刺穿神经根以及注射速度过快,以防造成组织损伤或者溶液外溢。

4. 缝合与恢复

仔细缝合肌肉层和皮肤,为动物做好保暖措施助其复苏,同时密切监测动物状况。

(切除椎板时需注意勿损伤脊髓以及神经束)

 

二、DRG 神经节取材

 从暴露到保存的黄金流程

1. 麻醉与固定

与上述注射操作中的麻醉和固定步骤相同。

2. 充分暴露椎管

切开皮肤和肌肉,广泛移除目标节段以及上下邻近节段的椎板,使脊髓、神经根和 DRG 清晰暴露。

3. 精细分离与摘取

  • 在显微镜下,使用精细镊子和剪刀:

  • 轻柔地分离 DRG 周围的硬膜、脂肪以及结缔组织。

  • 清晰辨别与 DRG 相连的背根(感觉根,向脊髓延伸)和脊神经(向外周延伸)。

  • 在靠近 DRG 本体的位置切断背根和脊神经。

  • 用镊子轻轻夹住神经残端或者 DRG 包膜(避免挤压胞体),将完整的 DRG 取出。

4. 即刻处理

取材之后,立即根据实验目的进行处理。例如,若用于 RNA / 蛋白研究,可将其速冻于液氮中;若用于形态学研究,可将其固定于多聚甲醛(PFA)中。

 

以下附上大小鼠神经节取材图片以及体视镜下神经节大体图片

如图中所示,能明显观察到神经束上有一处膨大组织(神经节)

附:大小鼠神经节取材及体视镜下观察要点

🚦 避坑指南:资深科研人员的血泪经验

1. 注射失败补救方法

  • 针头堵塞:将针退回 5nL,然后再推进,利用压力冲开堵塞物。
  • 位置偏移:注射器接荧光染料(如 Fast Blue),在紫外灯下确认染料分布情况。

2. 保障取材完整性

  • 在 DRG 下方垫上湿润的滤纸片,防止发生粘连。
  • 遇到粘连性结缔组织时,滴加胶原酶 IV(1mg/ml),孵育 2 分钟后再进行分离。

3. 提高术后生存率

  • 在椎板缺损的位置覆盖可吸收明胶海绵。
  • 术后连续 3 天皮下注射美洛昔康(5mg/kg)和恩诺沙星(10mg/kg)。
📌 文末提醒
DRG 相关实验对器械精度(如微量注射器)、操作手感要求极高,建议新手先通过解剖图谱模拟练习,再进行动物实验。后台私信回复【DRG】,即可获取技术指导(含操作技巧与要点)~
科研路上少走弯路,精准操作从细节开始!
本文整理自实验手册,实操需严格遵循动物伦理规范及实验室安全准则。

 

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作者 | 袁洪森

排版 | 翁小云

审核 | 韦云婷

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